رنگ آمیزی معکوس: روشی مؤثر برای تخلیص پروتئین HIV-1 Nef در سیستم بیان پروکاریوتی
Authors
Abstract:
سابقه و هدف: پروتئین Nef، یکی از پروتئین های تنظیمی ویروس HIV، دارای اپیتوپ های حفاظت شده متعددی است که در افراد آلوده به ایدز پاسخ های ایمنی قدرتمندی علیه آن ها مشاهده شده است. بنابراین، پروتئین Nef کاندید مناسبی برای تولید واکسن می باشد. هدف این پژوهش کلونینگ و بیان پروتئین Nef در سیستم بیان پروکاریوتی و تخلیص آن به روش رنگآمیزی معکوس می باشد. مواد و روش ها: توالی کدکننده پروتئین Nef از وکتور pUC19 توسط PCR تکثیر شد و الحاق آن به داخل وکتور بیانی pGEX6p2 انجام شد. این سازه طی فرایند ترانسفورماسیون به سویه باکتری E.coli BL21 منتقل شده و القای بیان پروتئین با استفاده از آنتیرپرسور IPTG صورت گرفت. تأیید بیان پروتئین با استفاده از آنالیز SDS-PAGE و وسترن بلات توسط آنتی بادی ضد Nef بررسی گردید. تخلیص پروتئین با استفاده از تکنیک رنگ آمیزی معکوس از روی ژل انجام شد. نتایج: نتایج آنالیز PCR و هضم آنزیمی وجود باند واضح حدود 648 جفت باز را روی ژل آگاروز تأیید کرد که نشانگر کلونینگ صحیح ژن Nef در وکتور بیان پروکاریوتی pGEX6p2 می باشد. هم چنین، وجود باند حدود 50 کیلودالتون نشانگر بیان پروتئین Nef توسط آنتیبادی منوکلونال ضد Nef در آنالیز وسترن بلات تأیید شد. در نهایت، باند خالص شده پروتئین توسط تکنیک رنگآمیزی معکوس به دست آورده شد. نتیجه گیری: پروتئین نوترکیب Nef بیان شده در میزبان E. coli با بازده مناسب توسط روش رنگ آمیزی معکوس تخلیص شد. پروتئین Nef در آینده به عنوان یک آنتیژن برای طراحی واکسن پروتئینی در مقابل عفونت ویروس HIV استفاده خواهد شد.
similar resources
رنگ آمیزی معکوس: روشی مؤثر برای تخلیص پروتئین hiv-۱ nef در سیستم بیان پروکاریوتی
سابقه و هدف: پروتئین nef، یکی از پروتئینهای تنظیمی ویروس hiv، دارای اپیتوپ های حفاظت شده متعددی است که در افراد آلوده به ایدز پاسخ های ایمنی قدرتمندی علیه آنها مشاهده شده است. بنابراین، پروتئین nef کاندید مناسبی برای تولید واکسن می باشد. هدف این پژوهش کلونینگ و بیان پروتئین nef در سیستم بیان پروکاریوتی و تخلیص آن به روش رنگآمیزی معکوس می باشد. مواد و روش ها: توالی کدکننده پروتئین nef از...
full textکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب فیوژن tat-nef ویروس hiv-۱ در سیستم بیانی پروکاریوتی
زمینه و هدف: یکی از پروتئین های مهم ویروس hiv-1 به نام nef نقش مهمی در چرخه تکثیر ویروس و پیشرفت بیماری ایدز دارد و القای پاسخ ایمنی بر ضد آن می تواند تا حدی عفونت ویروسی را مهار نماید. به علاوه، بخشی از ناحیه پروتئین فعال کننده رونویسی (tat، اسید آمینه های 48 تا 60) از ویروس hiv توانسته است به عنوان یک پپتید نفوذ کننده سلولی (cpp) عمل نماید. در این تحقیق، برای اولین بار کلونینگ و بیان فیوژن ta...
full textکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین پیلین سودوموناس آئروژینوزا در میزبان پروکاریوتی
زمینه و اهداف: سویه های پاتوژن سودوموناس آئروژینوزا پیلی قطبی تولید می کند که برای تحرک، چسبندگی و تهاجم مورد نیاز است. هدف از این مطالعه تولید و تخلیص پروتئین نوترکیب پیلین می باشد. مواد و روش ها: ژن کد کننده پیلین (pilA) از سویه PAO1 سودوموناس آئروژینوزا با بوسیله PCR جدا گردید و در وکتور بیانی pET-22b کلون شد. تایید ساختار وکتور نوترکیب به وسیله ی هضم آنزیمی دوگانه و تعیین توالی صورت گرفت....
full textکلونینگ و بیان ژن nef ویروس hiv-1
nef یکی از پروتئین های همراه در hiv است که برای همانند سازی ویروس در سلول های میزبان در طول عفونت ویروسی ضروری است. با توجه به جای گیری nef در غشای اندوزمی و پلاسمایی و اثر تحریک کننده ی آن بر خروج خود از طریق آزادسازی اگزوزم ها، و نیز اثر کاهنده ی آن بر سلول های cd4+، هدف از این مطالعه کلونینگ و بیان ژن nef ویروس hiv به منظور تهیه ی پروتئین nef نوترکیب بود. به این منظور سلول های بیان کننده ی پ...
کلون‌سازی، بیان و تخلیص پروتئین اینتگراز ویروس HIV و بررسی آنتی‌ژنیسیته آن
Background: Improving the performance of HIV diagnosis assays is one of the most important ways to reduce HIV transmission. Because of the high mutation rate of HIV, it is critical to use the conserved proteins to develop diagnostic immunoassay methods. Because integrase is one of the most conserved proteins of HIV, it may be a good target for this purpose. In this paper cloning, purification a...
full textکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین پیلین سودوموناس آئروژینوزا در میزبان پروکاریوتی
زمینه و اهداف: سویه های پاتوژن سودوموناس آئروژینوزا پیلی قطبی تولید می کند که برای تحرک، چسبندگی و تهاجم مورد نیاز است. هدف از این مطالعه تولید و تخلیص پروتئین نوترکیب پیلین می باشد. مواد و روش ها: ژن کد کننده پیلین (pila) از سویه pao1 سودوموناس آئروژینوزا با بوسیله pcr جدا گردید و در وکتور بیانی pet-22b کلون شد. تایید ساختار وکتور نوترکیب به وسیله ی هضم آنزیمی دوگانه و تعیین توالی صورت گرفت. و...
full textMy Resources
Journal title
volume 20 issue 5
pages 420- 426
publication date 2016-11
By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.
No Keywords
Hosted on Doprax cloud platform doprax.com
copyright © 2015-2023